目前城市生活污水脫氮除磷主要依靠生物法, 而生物法所面臨的兩個(gè)主要問題：一為原水碳源不足, 無法滿足脫氮除磷的需求; 二是剩余污泥產(chǎn)量大, 大量的剩余污泥需要得到妥善的處理處置.污泥發(fā)酵是污泥減量化和穩(wěn)定化的有效技術(shù)之一, 通過控制污泥齡使得污泥發(fā)酵維持在水解酸化階段可以積累短鏈脂肪酸(SCFAs), SCFAs為生物脫氮除磷的優(yōu)勢碳源, 而之前的研究證明了堿性污泥發(fā)酵可以強(qiáng)化SCFAs的生成量.

　　傳統(tǒng)的生物脫氮過程中生活污水中的NH4+-N由AOB轉(zhuǎn)化為NO2--N, 再由NOB轉(zhuǎn)化為NO3--N, 之后由反硝化菌以NO2--N或者NO3--N為電子受體, 利用碳源轉(zhuǎn)化為N2完成生物脫氮過程.通常所說的短程硝化是將硝化過程控制在亞硝化階段, 能夠節(jié)省約40%的碳源和25%的氧氣消耗并提高反硝化效率, 也可以為自養(yǎng)生物脫氮方式厭氧氨氧化提供底物.短程硝化的實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵是如何在硝化過程中抑制系統(tǒng)中NOB的活性, 目前已有的控制條件有溫度、pH、溶解氧、游離氨(FA)、游離亞硝酸(FNA)、低污泥齡和過程控制等.

　　本實(shí)驗(yàn)室之前的研究, 將污泥發(fā)酵混合物作為碳源, 不需要采用離心的方式獲取發(fā)酵液, 也不需要去除發(fā)酵液中的氮和磷, 且能夠滿足系統(tǒng)內(nèi)脫氮除磷的需要.已有的研究在使用堿性污泥發(fā)酵產(chǎn)物(污泥發(fā)酵液和污泥發(fā)酵混合物)作為碳源時(shí), 反應(yīng)器內(nèi)都出現(xiàn)了亞硝積累的現(xiàn)象.本文建立投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源的BNR系統(tǒng), 在運(yùn)行過程中系統(tǒng)內(nèi)逐步出現(xiàn)亞硝積累現(xiàn)象并在23 d后維持穩(wěn)定, 為進(jìn)一步探究剩余污泥堿性發(fā)酵產(chǎn)物對硝化細(xì)菌的影響, 采用批次實(shí)驗(yàn), 將剩余污泥堿性發(fā)酵物分離為發(fā)酵混合物、發(fā)酵液和發(fā)酵底泥, 分別研究其對AOB和NOB的影響, 探究系統(tǒng)內(nèi)短程硝化出現(xiàn)的原因.

　　1 材料與方法

　　1.1 投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源的BNR系統(tǒng)

　　投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源的BNR系統(tǒng)(F-SBR)如圖 1所示, 剩余污泥堿性發(fā)酵罐和F-SBR為兩個(gè)有效體積為10 L的SBR.剩余污泥堿性發(fā)酵罐為半連續(xù)式反應(yīng)器, 體積為10 L, 污泥停留時(shí)間SRT為6~8 d, pH控制在10±0.2, 溫度為30℃, 通過控制污泥發(fā)酵在水解酸化階段積累SCFAs, 根據(jù)SRT每周期排放剩余污泥發(fā)酵混合物至儲泥罐并加入等體積新鮮的剩余污泥.F-SBR利用污泥發(fā)酵混合物作為碳源, 每周期12 h, 采用厭氧-好氧-缺氧的運(yùn)行方式, 缺氧段投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源進(jìn)行反硝化, 排水比為50%.反應(yīng)器內(nèi)裝有pH探頭和DO探頭, 好氧段維持溶解氧在1.5~2mg·L-1, 反應(yīng)器MLSS維持在(4 930±124) mg·L-1.

圖 1 投加污泥發(fā)酵物作為碳源的BNR系統(tǒng)示意

　　1.2 實(shí)驗(yàn)用水及污泥來源

　　發(fā)酵所用的剩余污泥為北京高碑店污水處理廠的回流污泥, 發(fā)酵前進(jìn)行濃縮, MLSS為(10 512±1 219)mg·L-1, MLVSS為(5 604±5 000)mg·L-1.實(shí)驗(yàn)所使用的種泥取自高碑店污水處理廠硝化活性良好的活性污泥, 具有良好的全程硝化效果, 污泥濃度為(4 930±396)mg·L-1, MLVSS為(3 300±124)mg·L-1.實(shí)驗(yàn)用水為實(shí)際生活污水, 來自北京工業(yè)大學(xué)家屬區(qū)化糞池, 實(shí)驗(yàn)所使用的污泥發(fā)酵混合物取自運(yùn)行穩(wěn)定的堿性剩余污泥發(fā)酵罐, 具體參數(shù)如表 1所示.

表 1 生活污水與污泥發(fā)酵物基本特性

　　1.3 批次實(shí)驗(yàn)方法

　　批次實(shí)驗(yàn)所采用的裝置為有效體積為1.5 L的錐形瓶, 瓶內(nèi)裝有連接流量計(jì)的曝氣頭, 使用氣泵向錐形瓶內(nèi)提供充足的曝氣量, 保證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中處于氧飽和狀態(tài)(DO>7mg·L-1).批次實(shí)驗(yàn)的種泥均采用來自高碑店污水處理廠的硝化效果良好的全程硝化污泥, 用蒸餾水離心(4 000 r·min-1, 5 min), 清洗3遍, 溫度維持在25℃.對剩余污泥堿性發(fā)酵物進(jìn)行初步的分離, 使用低速離心機(jī)對污泥發(fā)酵混合物在4 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行分離, 得到發(fā)酵液與發(fā)酵底泥, 取出發(fā)酵液的發(fā)酵底泥離心洗泥3次, 用蒸餾水稀釋至原本體積, 并渦旋混合均勻得到與污泥發(fā)酵混合物等污泥濃度的發(fā)酵底泥.實(shí)驗(yàn)共設(shè)置4組反應(yīng)器, 1組為空白對照組, 2組加入體積比為3%的污泥發(fā)酵混合物, 3組加入體積比為3%的污泥發(fā)酵液, 4組加入體積比為3%的稀釋后的發(fā)酵底泥.首先模擬反應(yīng)器內(nèi)運(yùn)行進(jìn)行厭氧攪拌3 h, 加入配置的NH4Cl溶液(30mg·L-1)和NaNO2溶液(20mg·L-1), 用Na2CO3溶液調(diào)節(jié)堿度, 在飽和溶解氧(DO>7mg·L-1)下分別對AOB和NOB進(jìn)行活性的檢測.

　　1.4 分析方法

　　NH4+-N, NO2--N和NO3--N均采用國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)方法測定; pH值、DO和溫度采用Multi340i-WTW測定; MLSS、MLVSS采用重量法測定; SCFAS采用Agilent 6890N氣相色譜儀測定, 采用Agilent DB-WAXetr (30 m×0.53 mm×0.001 mm)色譜柱, 氮?dú)庾鲚d氣, 流速為20 mL·min-1, 檢測器為氫火焰檢測器(FID); 活性污泥系統(tǒng)中的AOB、NOB(nitrospira和nitrobactor)采用qPCR技術(shù)(SYBR Green法)進(jìn)行檢測, 采用土壤DNA快速試劑盒(MP Biomedaicals, OH, USA)對泥樣中的DNA進(jìn)行提取, 使用MX3000P實(shí)時(shí)定量PCR儀(Stratagene, La Jolla, CA)進(jìn)行測量, 利用不同特異性引物和擴(kuò)增程序進(jìn)行PCR測試, 具體各菌所用的特異性引物和退火溫度如表 2所示.

表 2 qPCR中所采用的的引物和退火溫度

　　1.5 計(jì)算方法

　　(1) 氨氮氧化率(AOR)的計(jì)算方法

　　式中, [NH4+-N]始為硝化開始時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NH4+-N濃度(mg·L-1); [NH4+-N]末為硝化結(jié)束時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NH4+-N濃度(mg·L-1).

　　(2) 硝態(tài)氮積累率(NAR)的計(jì)算方法

　　式中, [NO3--N]末為硝化結(jié)束后反應(yīng)器內(nèi)的NO3--N濃度(mg·L-1); [NH4+-N]始為硝化開始時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NH4+-N濃度(mg·L-1); [NO2--N]始為硝化開始時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NO2--N濃度(mg·L-1).

　　(3) 比氨氧化速率(SAOR)的計(jì)算方法

　　式中, [NH4+-N]始為硝化開始時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NH4+-N濃度(mg·L-1); [NH4+-N]末為硝化結(jié)束時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NH4+-N濃度(mg·L-1); MLVSS為反應(yīng)器內(nèi)的污泥質(zhì)量濃度(mg·L-1); tN為硝化反應(yīng)時(shí)間(min).

　　(4) 比硝態(tài)氮積累速率(SNaPR)的計(jì)算方法

　　式中, [NO3--N]末為硝化結(jié)束后反應(yīng)器內(nèi)的NO3--N濃度(mg·L-1); [NO3--N]始為硝化開始時(shí)反應(yīng)器內(nèi)的NO3--N濃度(mg·L-1); MLVSS為反應(yīng)器內(nèi)的污泥質(zhì)量濃度(mg·L-1); tN為硝化反應(yīng)時(shí)間(min).

　　(5) FA計(jì)算方法

　　2 結(jié)果與討論

　　2.1 投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源的BNR系統(tǒng)硝化過程中的短程硝化現(xiàn)象

　　為解決城市生活污水處理廠普遍存在的碳源不足而外加碳源和剩余污泥處理處置的問題, 本課題組建立了污泥厭氧發(fā)酵物強(qiáng)化低碳氮比生活污水脫氮除磷的BNR系統(tǒng), 堿性污泥發(fā)酵產(chǎn)物不經(jīng)過離心分離過程直接作為碳源進(jìn)行反硝化.具體聯(lián)系污水寶或參見http://wlmqsb.com更多相關(guān)技術(shù)文檔。

　　圖 2所示為硝化過程中添加剩余污泥堿性發(fā)酵混合物作為碳源的SBR反應(yīng)器(F-SBR)在長期運(yùn)行過程中好氧末氮轉(zhuǎn)化途徑, 系統(tǒng)在投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源后, 硝化性能下降, 好氧末有NH4+-N剩余.在15 d后系統(tǒng)開始逐漸適應(yīng)污泥發(fā)酵混合物的投加, 硝化活性開始逐漸恢復(fù), 并且反應(yīng)器內(nèi)開始出現(xiàn)亞硝積累現(xiàn)象并維持穩(wěn)定, 穩(wěn)定后反應(yīng)器內(nèi)好氧末的平均亞硝積累率維持在87.4%.圖 3為反應(yīng)器初始階段(Day1)、恢復(fù)階段(Day15)與短程硝化穩(wěn)定維持階段(Day43)的AOB和NOB活性進(jìn)行對比, 可以發(fā)現(xiàn)AOB的活性已經(jīng)得到了一定的恢復(fù), NOB的活性則受到了明顯的抑制, 硝化過程中硝態(tài)氮積累率(NAR)由初始的73.03%降低至8.89%, 比硝態(tài)氮積累速率(SNaPR)由初始的0.179 1 g·(g·d)-1下降至0.007 8 g·(g·d)-1.圖 4為反應(yīng)器內(nèi)長期AOB和NOB種群豐度情況(以干污泥計(jì)), 反應(yīng)器內(nèi)投加污泥發(fā)酵物后AOB和NOB的豐度均呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢, 反應(yīng)器在適應(yīng)污泥發(fā)酵物的投加后, AOB由6.08×107 copies·g-1增長至9.15×108 copies·g-1, 種群豐度上升; Nitrospria由1×109copies·g-1下降至4.79×108 copies·g-1, Nitrobacter由1.3×109 copies·g-1下降至3.94×108copies·g-1, NOB的基因拷貝數(shù)均下降一個(gè)數(shù)量級, 種群豐度下降.這也與反應(yīng)器內(nèi)的反應(yīng)情況吻合, 系統(tǒng)在適應(yīng)污泥發(fā)酵物的投加后AOB活性恢復(fù)且快速富集, 而NOB的活性則長期受到抑制, 種群豐度明顯下降.

圖 2 F-SBR中的亞硝積累情況

  圖 3 F-SBR中Day1、Day15及Day43的AOB和NOB活性對比

 圖 4 F-SBR中AOB和NOB種群豐度

　　在之前的研究中, Yuan等利用污泥厭氧發(fā)酵物強(qiáng)化低碳氮比生活污水脫氮除磷, 運(yùn)行過程中在好氧段出現(xiàn)了40%的亞硝積累現(xiàn)象; Liu等投加污泥發(fā)酵混合物為碳源在以A-O-A運(yùn)行的SBR反應(yīng)器中達(dá)到90%以上的亞硝積累率并維持穩(wěn)定.在利用剩余污泥堿性發(fā)酵產(chǎn)物作為碳源的長期實(shí)驗(yàn)過程中均產(chǎn)生了亞硝態(tài)氮積累的現(xiàn)象, 因此有必要探究不同類型的污泥發(fā)酵產(chǎn)物的投加對AOB和NOB活性的具體影響.

　　2.2 不同污泥發(fā)酵產(chǎn)物對硝化細(xì)菌硝化活性的影響

　　通過對剩余污泥發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離, 探究了不同類型產(chǎn)物對活性污泥硝化細(xì)菌硝化活性的影響. 4組批次實(shí)驗(yàn)在硝化過程中NH4+-N、NO2--N和NO3--N濃度隨時(shí)間的變化情況如圖 5所示.可以看出, 投加污泥發(fā)酵混合物和污泥發(fā)酵液后, 由于發(fā)酵物和發(fā)酵液中的氨氮沒有進(jìn)行預(yù)處理去除, 1組和2組在投加發(fā)酵產(chǎn)物后氨氮的濃度和pH值均有所上升.由于硝化反應(yīng)需要堿度, 硝化細(xì)菌適宜生長在pH 7.2~8.0的弱堿性環(huán)境當(dāng)中, AOB和NOB對堿度環(huán)境的要求不同, 其最適范圍分別為7.9~8.2和7.2~7.6, 在pH值升高到8.0以上時(shí)會出現(xiàn)亞硝酸鹽積累現(xiàn)象, 同時(shí)pH值會對系統(tǒng)內(nèi)的FA和FNA的濃度產(chǎn)生顯著影響.本研究中1~4實(shí)驗(yàn)組的pH值分別為7.33、7.60、7.59和7.35, pH值范圍相差不大.有報(bào)道指出FA能對系統(tǒng)內(nèi)的AOB和NOB造成選擇性抑制, 實(shí)現(xiàn)短程硝化, 但經(jīng)過計(jì)算, 1組和2組內(nèi)的FA濃度僅為0.02 mg·L-1, 并沒有達(dá)到FA抑制的濃度.硝化活性良好的活性污泥在硝化結(jié)束后并未直接產(chǎn)生亞硝態(tài)氮積累現(xiàn)象, 但1組(空白)與4組(投加發(fā)酵底泥)的氨氮降解率要高于2組(投加污泥發(fā)酵混合物)和3組(投加污泥發(fā)酵液), 而1組(空白)的硝氮生成量要高于剩余3組投加污泥發(fā)酵產(chǎn)物的實(shí)驗(yàn)組.

圖 5 投加不同污泥發(fā)酵產(chǎn)物下污泥NH4+-N、NO2--N和NO3--N的變化

　　進(jìn)一步考察不同污泥發(fā)酵產(chǎn)物對活性污泥系統(tǒng)硝化性能的影響, 分別考察系統(tǒng)內(nèi)的氨氮氧化率、硝態(tài)氮積累率、比氨氧化速率、比硝態(tài)氮生成速率的變化情況(圖 6). 1組在未投加污泥發(fā)酵產(chǎn)物的情況下, 原始的AOR和SAOR(以N/VSS計(jì))分別為97.29%和0.135 7 g·(g·d)-1, NAR和SNaPR分別為73.03%和0.179 3 g·(g·d)-1, AOB和NOB活性良好. 2~4實(shí)驗(yàn)組污泥的AOR分別為67.34%、77.14%和97.26%, SAOR分別為0.123 6、0.151 0和0.131 0 g·(g·d)-1, 可以看出2組(投加發(fā)酵混合物)AOB的活性有所下降; 3組(投加發(fā)酵液)AOB的活性反而有所上升; 4組(投加發(fā)酵底泥)AOB的活性相較于原始污泥則沒有太大變化.污泥的NAR分別為49.47%、49.43%和71.34%, SNaPR分別為0.151 0、0.161 7和0.186 4 g·(g·d)-1, 可以看出2組(投加發(fā)酵混合物)和3組(投加發(fā)酵液)的實(shí)驗(yàn)組中, 硝態(tài)氮積累率和比硝態(tài)氮積累速率都有了明顯的下降, NOB的活性受到了抑制, 而4組(投加發(fā)酵底泥)比硝態(tài)氮積累速率反而有所上升, 證明NOB的活性相比于其他實(shí)驗(yàn)組有所提高.

圖 6 投加不同污泥發(fā)酵產(chǎn)物下污泥反應(yīng)速率的變化

　　硝化效果良好的全程污泥在投加不同剩余污泥堿性發(fā)酵產(chǎn)物后, 投加污泥發(fā)酵混合物的實(shí)驗(yàn)組中AOB和NOB的活性均有所下降, 投加污泥發(fā)酵液的實(shí)驗(yàn)組中AOB的活性提高而NOB的活性下降, 投加污泥發(fā)酵底泥的實(shí)驗(yàn)組AOB活性略有下降, NOB的活性反而有所提高.

　　2.3 投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源的BNR系統(tǒng)的短程硝化現(xiàn)象分析

　　Ji等的研究指出, 其預(yù)處理去除氮和磷的污泥發(fā)酵液中乙酸、丙酸、蛋白質(zhì)和碳水化合物是主要的有機(jī)成分, 發(fā)酵液中同時(shí)含有Zn2+、Cu2+和Mn7+等金屬離子并分別進(jìn)行了測定, 發(fā)現(xiàn)其對硝化細(xì)菌都幾乎無影響, 不是實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生亞硝態(tài)氮積累的主要原因, 而其在批次實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)投加腐殖酸能夠得到更高的亞硝積累率, 所以提出腐殖酸是實(shí)驗(yàn)中短程硝化的主要原因.但劉瑾瑾等進(jìn)行了用腐殖酸對活性污泥進(jìn)行短期預(yù)處理, 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腐殖酸預(yù)處理在短程期內(nèi)對AOB的活性基本沒有影響, 在NOB活性較高時(shí)不會影響NOB的活性.

　　Yuan等的研究指出, 污泥發(fā)酵混合物的投加促進(jìn)了厭氧釋磷的過程, 導(dǎo)致在好氧段聚磷菌過量利用溶解氧進(jìn)行吸磷與NOB競爭溶解氧, 使得NOB一直處于抑制狀態(tài).但在本實(shí)驗(yàn)中, 污泥發(fā)酵混合物作為碳源僅在好氧段結(jié)束后投加, 并未促進(jìn)厭氧釋磷的過程, 因此這并不是反應(yīng)器內(nèi)產(chǎn)生短程硝化現(xiàn)象的原因.

　　在本實(shí)驗(yàn)中, 并未對氮和磷進(jìn)行預(yù)處理去除也未對發(fā)酵混合物進(jìn)行離心分離, pH值范圍始終維持在7.32~7.6, 亦不是導(dǎo)致系統(tǒng)內(nèi)AOB和NOB活性差異的主要因素, 通過計(jì)算得出FA的濃度遠(yuǎn)沒有達(dá)到NOB的抑制濃度.發(fā)酵底泥中所含有的主要菌種為水解酸化菌, 投加至反應(yīng)器內(nèi)會引起反應(yīng)器中出現(xiàn)污泥發(fā)酵現(xiàn)象, 3組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明, 發(fā)酵底泥的投加并未抑制NOB的活性, 反而其活性還有所升高.污泥發(fā)酵混合物和污泥發(fā)酵液的投加則確實(shí)抑制了NOB的活性, 區(qū)別是污泥發(fā)酵混合物的初期投加會對AOB也造成抑制, 而發(fā)酵液由于去除了污泥發(fā)酵混合物中的底泥, AOB的活性反而有所上升而抑制了NOB的活性.因此在本實(shí)驗(yàn)投加污泥發(fā)酵混合物作為碳源的BNR系統(tǒng)中污泥發(fā)酵混合物的初期投加使得系統(tǒng)的硝化活性惡化, 而系統(tǒng)逐漸馴化適應(yīng)后AOB能夠更快地恢復(fù)并得到富集, 而NOB在系統(tǒng)內(nèi)一直受到抑制, 因此系統(tǒng)中能夠?qū)崿F(xiàn)穩(wěn)定的短程硝化.

　　3 結(jié)論

　　(1) 用污泥發(fā)酵混合物和發(fā)酵液作為碳源在其硝化過程中, SNaPR由初始的0.179 1 g·(g·d)-1下降至0.007 8 g·(g·d)-1, 系統(tǒng)內(nèi)NOB的活性受到抑制, 能夠?qū)崿F(xiàn)短程硝化過程(NAR=87.4%), 有利于加速硝化速率及節(jié)省該類型碳源的投加.

　　(2) 以剩余污泥堿性發(fā)酵物為碳源的BNR系統(tǒng)在投加污泥發(fā)酵混合物初期會導(dǎo)致硝化活性惡化, 在系統(tǒng)逐步適應(yīng)后(16 d) AOB活性恢復(fù)而NOB的活性受到抑制從而實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)內(nèi)穩(wěn)定的短程硝化效果.

　　(3) 投加污泥發(fā)酵混合物和發(fā)酵液后在硝化過程中NOB活性下降, SNaPR由初始的0.179 3 g·(g·d)-1分別下降至0.151 0 g·(g·d)-1和0.161 7 g·(g·d)-1, 而投加污泥發(fā)酵混合物同時(shí)會降低AOB的活性, SAOR由初始的0.135 7 g·(g·d)-1下降至0.123 6 g·(g·d)-1, 發(fā)酵液則對AOB活性沒有顯著影響.

　　(4) 投加發(fā)酵底泥后在硝化過程中對AOB活性沒有顯著影響, 但系統(tǒng)內(nèi)的SNaPR由初始的0.179 3 g·(g·d)-1上升至0.186 4 g·(g·d)-1, NOB的活性反而有所提高.

　　(5) 系統(tǒng)內(nèi)短程硝化產(chǎn)生的原因主要為剩余污泥堿性發(fā)酵過程中產(chǎn)生物質(zhì)對AOB和NOB造成的選擇性抑制.(來源：北京工業(yè)大學(xué)城鎮(zhèn)污水深度處理與資源化利用技術(shù)國家工程實(shí)驗(yàn)室 作者：邱圣杰)