1 引言

　　據(jù)統(tǒng)計(jì),至“十二五”期末我國濕污泥量(含濕量80%)將突破4600萬t,而污泥厭氧消化技術(shù)以其低能耗、高產(chǎn)出的經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢(shì)成為污泥資源化利用的主要技術(shù)之一.除厭氧消化產(chǎn)甲烷以外,污泥產(chǎn)揮發(fā)性脂肪酸(VFA)也是實(shí)現(xiàn)污泥資源化的有效途徑,近年來,越來越多的學(xué)者開始關(guān)注污泥厭氧發(fā)酵產(chǎn)揮發(fā)性脂肪酸.目前,有關(guān)污泥厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸的研究主要集中在通過改進(jìn)裝置構(gòu)型、產(chǎn)酸微生物生態(tài)、優(yōu)化控制運(yùn)行條件,如控溫、pH等條件因素來提高產(chǎn)酸效率.已有研究表明,通過調(diào)節(jié)發(fā)酵污泥底物的C/N比可增加發(fā)酵產(chǎn)酸量并調(diào)控其產(chǎn)酸類型,然而,目前研究人員對(duì)污泥厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸過程中不同C/N比與關(guān)鍵酶酶活及有機(jī)酸產(chǎn)酸量間的關(guān)系并不清楚.僅有為數(shù)不多的研究,如優(yōu)化C/N比條件作為酒精發(fā)酵的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯?而對(duì)于數(shù)學(xué)模型則沒有報(bào)道.數(shù)學(xué)模型法作為現(xiàn)代科學(xué)研究的重要手段,它有助于描述和理解生物處理系統(tǒng)的反應(yīng)過程,可為工程設(shè)計(jì)提供理論上的指導(dǎo);還有助于工藝的優(yōu)化和控制,從而更好地指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)運(yùn)行.

　　多元線性回歸是一種理想的描述多個(gè)因素之間關(guān)系的數(shù)學(xué)方法,能較好地確定被解釋變量和解釋變量之間的關(guān)系,在很多領(lǐng)域得到了應(yīng)用(常盛等,2011).因此,本研究通過設(shè)置不同C/N比條件來調(diào)控污泥厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸,在Matlab7.0平臺(tái)上建立多元線性回歸函數(shù)模型,擬合C/N比、關(guān)鍵酶酶活和產(chǎn)酸類型之間的關(guān)系,以期為今后污泥發(fā)酵產(chǎn)酸條件調(diào)控研究和工程放大提供參考.

　　2 材料與方法

　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料

　　2.1.1 污泥與種泥

　　原始污泥取自無錫市太湖新城污水處理廠,發(fā)酵底物是經(jīng)過熱堿預(yù)處理的污泥上清液.污泥采集后置于陰涼處,風(fēng)干10 d,采用機(jī)械粉碎儀粉碎,再過30目篩,密封置于-15 ℃冰柜中保存.

　　接種污泥來源于無錫某檸檬酸廠上流式厭氧污泥反應(yīng)器(UASB)中的厭氧顆粒污泥.在100 ℃下煮沸2 h以殺死產(chǎn)甲烷菌(Logan et al., 2002),然后導(dǎo)入有效容積為2 L的UASB中進(jìn)行馴化,活化種泥中的產(chǎn)酸菌(郭磊等,2008),馴化溫度為35 ℃.每日監(jiān)測(cè)馴化種泥的pH值,待種泥馴化后出水pH值降低至4.0左右,穩(wěn)定3~5 d后,認(rèn)為種泥馴化成功.原始污泥和污泥預(yù)處理液及接種種泥的性質(zhì)見表 1.

　　表 1 原始污泥、污泥預(yù)處理液和接種污泥的性質(zhì)

　　2.1.2 厭氧發(fā)酵

　　調(diào)節(jié)熱-堿預(yù)處理后離心液pH為10.0,取500 mL離心液置于1000 mL的厭氧反應(yīng)瓶中,分別加入不同量葡萄糖,以使得底物混合液的初始C/N比為12、56、69、156.接入馴化后的種泥,種泥接種量為10%(種泥和待處理水的體積比).污泥發(fā)酵前充氮?dú)?0 min以去除氧氣,然后迅速密封置于轉(zhuǎn)速為120 r·min-1和溫度(35±1)℃的搖床厭氧發(fā)酵.在發(fā)酵期間,每12 h調(diào)節(jié)pH為初始的10.0(Logan et al., 2002).每24 h取樣1次,用針管吸出部分發(fā)酵液,取樣完成后調(diào)節(jié)pH并充氮?dú)獗３謪捬?

　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)藥品和材料

　　本實(shí)驗(yàn)采用的藥品包括4-甲基戊酸(0.83 g·L-1)、磷酸溶液(3 mol·L-1)、NaOH(3 mol·L-1)、HCL(3 mol·L-1)等;主要儀器包括pH計(jì)(Mettler Toledo,Switzerland)、氣相色譜儀(GC-2010 Shimadzu Corporation,Tokyo,Japan)、馬弗爐、凱氏定氮儀(Buchi,Switzerland),離心機(jī)(Eppendorff,Germany)等.

　　2.2 試驗(yàn)方法 2.2.1 污泥初始指標(biāo)測(cè)定

　　污泥預(yù)處理前后的總固體(TS)、溶解性固體(SCOD)及污泥揮發(fā)性固體(VS)的測(cè)定采用重量法(Bligh et al., 1959),具體操作詳見GB11901-89和《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》.pH值測(cè)定參照國標(biāo)法.

　　污泥中的總脂類物質(zhì)采用Bligh-Dyer方法提取后,在 80 ℃下干燥直至溶劑完全揮發(fā)后,采用重量法測(cè)定(Bligh et al., 1959).總氮采用凱氏定氮法測(cè)定.總蛋白含量通過凱氏氮減去氨氮后再乘以 6.25計(jì)算得到(Miron et al., 2000).氨氮采用納氏試劑比色法測(cè)定,污泥中的總碳水化合物采用甲醛離心法提取后(Aquino et al., 2004),再用苯酚-硫酸法測(cè)定(Dubois et al., 1956).用 Liquid TOC 分析儀測(cè)定總有機(jī)碳,詳見《水質(zhì)總有機(jī)碳的測(cè)定燃燒氧化-非分散紅外吸收法》(HJ/T71-2001).污泥中的總磷含量用鉬酸銨分光光度法測(cè)定,詳見《水質(zhì)總磷的測(cè)定鉬酸銨分光光度法》(GB11893-89).

　　2.2.2 關(guān)鍵酶活測(cè)定

　　乙酸激酶(AK)的活性采用文獻(xiàn)(Rose,1955)的方法提取并測(cè)定.磷酸轉(zhuǎn)移乙酰酶(PTA)的提取方法同乙酸激酶,活性測(cè)定參照文獻(xiàn)(Andersch et al., 1983)方法.丁酸激酶(BK)微生物細(xì)胞的破壁方法和提取方法同乙酸激酶,活性測(cè)定采用文獻(xiàn)(Zhu et al., 2003)方法.磷酸轉(zhuǎn)移丁酰酶(PTB)微生物細(xì)胞的破壁和提取方法同乙酸激酶,活性測(cè)定采用文獻(xiàn)(Zhu et al., 2003)方法. 甲基丙二酰CoA變位酶(MCM)活性測(cè)定采用文獻(xiàn)(Kellermeyer et al., 1969)方法.

　　2.2.3 揮發(fā)性短鏈脂肪酸的測(cè)定

　　采用GC法檢測(cè)揮發(fā)性短鏈脂肪酸的質(zhì)量濃度,樣品處理及色譜條件等參見文獻(xiàn)(Liu et al., 2008).為方便不同條件下產(chǎn)酸效率的比較,將測(cè)得的VFAs濃度折算成 COD值,換算方法參見文獻(xiàn)(Liu et al., 2008).

　　3 結(jié)果與討論

　　3.1 有機(jī)酸濃度的變化

　　分別設(shè)定底物初始C/N比值為12、56、156,進(jìn)行厭氧發(fā)酵.發(fā)酵過程中時(shí),體系中有機(jī)酸的產(chǎn)量分別如圖 1所示.由圖 1可以看出,底物初始C/N比不同,厭氧發(fā)酵產(chǎn)生的末端酸化產(chǎn)物也不同.C/N比為12時(shí),產(chǎn)量最大的為乙酸,在第5 d達(dá)到9.45 kg·m-3(以COD計(jì),下同);其次是丙酸,第5 d時(shí)可以達(dá)到3.55 kg·m-3;最低是丁酸,第5 d時(shí)產(chǎn)量約為2.35 kg·m-3(圖 2a).當(dāng)C/N比為56時(shí),產(chǎn)量最大的為丙酸,在第5 d可達(dá)到10.36 kg·m-3;其次是乙酸,可以達(dá)到7.79 kg·m-3;最低是丁酸,產(chǎn)量約為2.79 kg·m-3(圖 2b).當(dāng)C/N比為156時(shí),產(chǎn)量最大的為丁酸,在第5 d達(dá)到13.59 kg·m-3;其次是乙酸,可以達(dá)到5.89 kg·m-3;最低是丁酸,產(chǎn)量約為4.72 kg·m-3(圖 2c).

　　圖 1 C/N比對(duì)發(fā)酵產(chǎn)酸的影響(a.C/N=12,b.C/N=56,c. C/N=156)

　　圖 2 底物發(fā)酵產(chǎn)酸的代謝途徑

　　3.2 多項(xiàng)式關(guān)系的數(shù)學(xué)模型的建立

　　在發(fā)酵過程中,通過設(shè)定不同C/N比條件,測(cè)定不同C/N比下關(guān)鍵酶的酶活和產(chǎn)酸量,則三者可以建立函數(shù)關(guān)系.短鏈脂肪酸的生成途徑如圖 2所示(Feng et al., 2009),乙酸生成的關(guān)鍵酶分別為乙酸激酶(AK)和磷酸轉(zhuǎn)移乙酰酶(PTA),丁酸合成的關(guān)鍵酶有丁酸激酶(BK)和磷酸轉(zhuǎn)移丁酰酶(PTB);丙酮酸轉(zhuǎn)化為乙酸過程中,關(guān)鍵酶為甲基丙二酰CoA變位酶(MCM).由于底物C/N比的改變會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)酸微生物體內(nèi)的酶活性改變,從而改變微生物不同代謝途徑的代謝通量,并最終導(dǎo)致各種短鏈脂肪酸的生成受到影響,由此產(chǎn)生了不同的產(chǎn)酸類型.因此,C/N比是自變量,而關(guān)鍵酶活性和產(chǎn)酸類型是因變量.

　　根據(jù)以上理論分析,為了建立C/N比、關(guān)鍵酶活、不同酸產(chǎn)量之間的函數(shù)關(guān)系模型,采用多元非線性回歸(霍倩等,2002)的方法,建立了二元二次多項(xiàng)式模型(1)、二元三次多項(xiàng)式模型(2)、二元三次多項(xiàng)式模型(3).

　　式中,Z為因變量,表示有機(jī)酸產(chǎn)量,X和Y為自變量,分別表示C/N比和關(guān)鍵酶活性,bi表示函數(shù)中的常數(shù).根據(jù)實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)以上3種多項(xiàng)式模型進(jìn)行擬合優(yōu)度的檢驗(yàn),結(jié)果如表 2所示.

　　表 2 模型擬合優(yōu)度分析

　　表 2中,A、B、C分別表示3種關(guān)系式模型,乙酸-AK、乙酸-PTA等分別表示各種產(chǎn)物酸與其對(duì)應(yīng)的關(guān)鍵酶.根據(jù)優(yōu)度擬合理論,R2大于 0.9的較好,因此,在多項(xiàng)式A乙酸-AK、B乙酸-AK和C乙酸-AK的R2檢驗(yàn)中,C乙酸-AK效果最好,為0.9327.同樣的,C乙酸-PTA、C丙酸-MCM、C丁酸-BK、C丁酸-PTB的R2分別為0.9348、0.9494、0.9880和0.9771,均具有最高的R2.模型擬合優(yōu)度檢驗(yàn)同時(shí)要求模型殘差平方和越小越好,因此,在多項(xiàng)式A乙酸-AK、B乙酸-AK和C乙酸-AK的殘差平方和檢驗(yàn)中,C乙酸-AK的效果最好,為0.0292.同樣的,C乙酸-PTA、C丙酸-MCM、C丁酸-BK、C丁酸-PTB的殘差平方和分別為0.0076、1.8556、0.0038和3.1362,均具有最小的殘差平方和.綜合以上分析,可以判定二元三次多項(xiàng)式C模型擬合度最好.依據(jù)二元三次多項(xiàng)式C標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu),結(jié)合實(shí)驗(yàn)測(cè)得的不同C/N比條件下的關(guān)鍵酶活和各種有機(jī)酸產(chǎn)量,建立了可視化的三者之間的曲面模型.

　　3.3 C/N比-關(guān)鍵酶-乙酸曲面模型的建立

　　根據(jù)上述多項(xiàng)式C的形式,利用Matlab軟件進(jìn)行擬合,得到多項(xiàng)式當(dāng)中相應(yīng)bi的值,進(jìn)而得出C/N比-關(guān)鍵酶AK-乙酸之間的定量關(guān)系表達(dá)式(4)和C/N比-關(guān)鍵酶PTA-乙酸之間的定量關(guān)系表達(dá)式(5).

　　根據(jù)定量關(guān)系式(4)和(5)繪制得到圖 3的可視化曲面模型.從圖 3的曲面模型可以看出：在初始C/N比為10~50時(shí),酶活性較低,乙酸激酶(AK)和磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)平均酶活性分別為1.06 U·mg-1和0.67 U·mg-1,而乙酸濃度從2.8 kg·m-3(以COD計(jì),下同)上升到7.8 kg·m-3.在初始C/N比為50~150時(shí),AK和PTA酶活性較高,平均值分別為2.79 U·mg-1和1.08 U·mg-1,而乙酸濃度為2.6 kg·m-3.從以上數(shù)據(jù)可知,酶活性水平和乙酸產(chǎn)量不一致,說明在此C/N比條件下,乙酸主要不是通過丙酮酸途徑合成,而可能是通過丙酸、丁酸的轉(zhuǎn)化形成.其他學(xué)者的研究都表明(任南琪等,2005;劉曉玲,2008),C/N比通過直接或間接影響產(chǎn)能過程及NADH(或NADPH)/NAD+(或 NADP+)的氧化還原偶聯(lián)過程,促使不同發(fā)酵產(chǎn)酸類型的形成.在低C/N比條件下,乙酸的產(chǎn)生主要是通過氨基酸之間的Stickland反應(yīng)形成,本文的曲面模型很好地解釋了這一結(jié)論.

　　圖 3 C/N比、產(chǎn)乙酸關(guān)鍵酶和不同酸產(chǎn)量之間的曲面模型(a.乙酸激酶(AK),b.磷酸轉(zhuǎn)移乙酰酶(PTA)

　　3.4 C/N比-關(guān)鍵酶MCM-丙酸曲面關(guān)系的數(shù)學(xué)模型的建立

　　C/N比-關(guān)鍵酶MCM-丙酸之間的定量關(guān)系表達(dá)式如式(6)所示.由C/N比-關(guān)鍵酶MCM-丙酸曲面模型可以看出,當(dāng) C/N比為 55~70時(shí),甲基丙二酰CoA變位酶(MCM)活性都有大幅度增加,同時(shí)丙酸的產(chǎn)量也開始上升,這與任南琪等(2005)的研究一致,表明丙酸型發(fā)酵中,丙酸產(chǎn)生于糖酵解丙酮酸途徑.根據(jù)已有的理論研究,通常情況下,丙酸型發(fā)酵代謝途徑有利于NADH+H+的氧化,而丁酸型發(fā)酵缺乏對(duì) NADH 的再生能力.所以當(dāng) C/N 值處于56~69(王勇等,2004;任南琪等,2005)時(shí),微生物的細(xì)胞合成速率較小,丙酸型發(fā)酵比丁酸型發(fā)酵有更高的穩(wěn)定性,產(chǎn)酸結(jié)果就形成丙酸型發(fā)酵,這也解釋了本文曲面模型當(dāng)中丙酮酸的產(chǎn)量和關(guān)鍵酶活性大幅提升的原因.

　　3.5 C/N比-關(guān)鍵酶BK-丁酸曲面關(guān)系的數(shù)學(xué)模型的建立

　　C/N比-關(guān)鍵酶BK-丁酸之間的定量關(guān)系如式(7)所示,C/N比-關(guān)鍵酶PTB-丁酸之間的定量關(guān)系如式(8)所示.

　　在初始C/N比為150及更高時(shí),丁酸激酶(BK)和磷酸轉(zhuǎn)移丁酰酶(PTB)的活性均有大幅度增加.以前的研究表明,丁酸的產(chǎn)生主要由糖酵解丙酮酸形成(任南琪等,2005).隨著C/N值升高到156,碳作為微生物細(xì)胞的重要組成元素,促使了細(xì)胞合成代謝速率的提高,有機(jī)質(zhì)分解代謝過程中產(chǎn)生的部分NADH(或NADPH)能夠被厭氧微生物迅速地用于細(xì)胞合成而得以再生,所以,呈現(xiàn)較穩(wěn)定的丁酸型發(fā)酵類型.

　　已有研究表明,通過調(diào)控污泥預(yù)處理液的初始 C/N 值可實(shí)現(xiàn)乙酸、丙酸和丁酸不同厭氧發(fā)酵類型之間的轉(zhuǎn)變.在初始C/N比為10~50時(shí),此時(shí)發(fā)酵是乙酸型發(fā)酵.而當(dāng) C/N 值為 55~70時(shí),此時(shí)厭氧發(fā)酵類型則轉(zhuǎn)變?yōu)楸�酸�?在初始C/N比為150及更高時(shí),此時(shí),丙酸型發(fā)酵類型則轉(zhuǎn)變?yōu)槎∷嵝?任南琪等,2005).本文圖 3~5建立的曲面模型結(jié)果表明,所建立的模型能很好地反映這一趨勢(shì),說明模型能較好地模擬C/N比調(diào)控下的污泥發(fā)酵產(chǎn)酸實(shí)驗(yàn)結(jié)果.具體參見污水寶商城資料或http://wlmqsb.com更多相關(guān)技術(shù)文檔。

　　圖 4 C/N比、丙酸關(guān)鍵酶-甲基丙二酰CoA變位酶和不同酸產(chǎn)量之間的曲面模型

　　圖 5 C/N比、丁酸關(guān)鍵酶活和不同酸產(chǎn)量之間的曲面模型(a.丁酸激酶(BK),b.磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTB)

　　4 結(jié)論

　　1)采用多元非線性回歸的方法建立了不同C/N比、關(guān)鍵酶活和酸產(chǎn)量之間的函數(shù)關(guān)系模型.經(jīng)擬合優(yōu)度、顯著性和殘差平方和等指標(biāo)的比較,發(fā)現(xiàn)二元三次多項(xiàng)式模型的擬合優(yōu)度系數(shù)和顯著性高、殘差平方和較小,表明該模型能較好地?cái)M合三因素之間的定量關(guān)系.

　　2)調(diào)節(jié)污泥水解液的C/N比分別為12、56、156,將測(cè)定的關(guān)鍵酶酶活和乙酸、丙酸、丁酸的結(jié)果代入建立的多項(xiàng)式模型,應(yīng)用Matlab 7.0 軟件得到了相應(yīng)的定量關(guān)系式和可視化的曲面模型,曲面模型的結(jié)果很好地驗(yàn)證了不同C/N比條件下的產(chǎn)酸代謝途徑.