1 引言(Introduction)

　　孔雀石綠(Malachite Green, MG)是一種極易溶于水的三苯甲烷類染料, 可廣泛應(yīng)用于印染、食品加工、醫(yī)藥、水產(chǎn)養(yǎng)殖和工業(yè)等各個(gè)領(lǐng)域中, 尤其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中, 孔雀石綠可作為驅(qū)蟲劑、殺蟲劑、防腐劑廣泛用于預(yù)防與治療水霉病、鰓霉病和小瓜蟲病等.但其廣泛使用造成的負(fù)面效應(yīng), 如對哺乳動(dòng)物細(xì)胞、水生生物和其他有機(jī)生命體的致癌致畸效應(yīng)也逐漸凸現(xiàn)出來, 引起了科學(xué)界的廣泛關(guān)注.因此, 美國、日本、英國等許多國家和地區(qū)立法嚴(yán)禁使用孔雀石綠, 且該染料已被美國食品和藥物管理局(US Food and Drug Administration)列為致癌性測試的優(yōu)先化學(xué)物質(zhì)之一, 也被我國列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》中, 禁止用于所有食品動(dòng)物.

　　吸附、化學(xué)沉淀、光降解、滲透和膜過濾等理化處理技術(shù)已被用于高殘留、高毒性、高致畸致癌性的孔雀石綠污染處理，然而, 理化處理方法往往費(fèi)用昂貴且易產(chǎn)生二次污染.生物處理技術(shù)作為一種環(huán)境友好型且高效低耗的處理手段而受到青睞.本課題組針對生物處理技術(shù)實(shí)際應(yīng)用中受溫度、pH值、碳氮含量等環(huán)境因素影響較大的難題, 致力于篩選環(huán)境適應(yīng)性更強(qiáng)的染料降解菌株, 已相繼報(bào)道了多株可高效降解孔雀石綠和甲基橙等染料的菌株, 如Enterobacter sp. DH9、Aeromonas sp. DH6等.但總體而言, 當(dāng)前的研究工作多集中在降解行為的研究上, 而有關(guān)降解機(jī)制的研究則相對較為薄弱.因此, 本實(shí)驗(yàn)在前期研究工作的基礎(chǔ)上研究菌株CV-v的降解行為, 同時(shí)對該菌株降解孔雀石綠的降解機(jī)制進(jìn)行探討, 以期為指導(dǎo)實(shí)際染料污染水體修復(fù)墊定理論基礎(chǔ).

　　2 材料與方法(Materials and methods)2.1 菌種來源

　　菌株CV-v來源于常年被皮革廢水污染的污泥中, 保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC M 2015177).

　　2.2 培養(yǎng)基與試劑

　　孔雀石綠(Malachite Green, λmax=620 nm)屬于三苯甲烷類染料, 購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;其它生化試劑均為國產(chǎn)分析純.

　　碳源影響實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基母液(pH=7.0, g·L-1)：Na2HPO4 15.13, KH2PO4 3.0, NaCl 0.5, NH4Cl 1.0, MgSO4·7H2O 0.491, CaCl2·2H2O 0.026.氮源影響實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基母液(pH=7.0, g·L-1)：Na2HPO4 15.13, KH2PO4 3.0, NaCl 0.5, MgSO4·7H2O 0.491, CaCl2·2H2O 0.026.其他因子影響實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基母液(pH=7.0)為2.0 g·L-1的酵母粉溶液.LB培養(yǎng)基(pH=7.0~7.2, g·L-1)：蛋白胨10, 酵母膏5, NaCl 10.

　　2.3 菌株CV-v對孔雀石綠的脫色特性研究2.3.1 碳氮源對孔雀石綠脫色的影響

　　將供試碳、氮源(碳源：葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、木糖和淀粉;氮源：氯化銨、硝酸鈉、牛肉浸提物、酵母粉、蛋白胨、谷氨酸和甘氨酸)分別添加至培養(yǎng)基中, 使其終濃度為2.0 g·L-1.滅菌后, 添加已滅菌的終濃度為100 mg·L-1的孔雀石綠, 接種等量菌株CV-v過夜培養(yǎng)物(菌體干重為0.1~0.2 g·L-1), 并于30 ℃、180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng), 定時(shí)取樣測定.

　　2.3.2 pH值對孔雀石綠脫色的影響

　　用1.0 mol·L-1的HCl或NaOH將培養(yǎng)基初始pH值分別調(diào)為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0和10.0.滅菌后, 添加已滅菌的終濃度為100 mg·L-1的孔雀石綠, 接種等量菌株CV-v過夜培養(yǎng)物(菌體干重為0.1~0.2 g·L-1), 并于30 ℃、180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng), 定時(shí)取樣測定.

　　2.3.3 溫度對孔雀石綠脫色的影響

　　設(shè)定溫度梯度分別為10、20、30、40和50 ℃.培養(yǎng)基滅菌后, 添加已滅菌的終濃度為100 mg·L-1的孔雀石綠, 接種等量菌株CV-v過夜培養(yǎng)物(菌體干重為0.1~0.2 g·L-1), 并于180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng), 定時(shí)取樣測定.

　　2.3.4 染料濃度對孔雀石綠脫色的影響

　　分別調(diào)整初始染料濃度為100、200、300、400、500、600、700、800、900和1000 mg·L-1, 接種等量菌株CV-v過夜培養(yǎng)物(菌體干重為0.1~0.2 g·L-1), 并于30 ℃、180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng), 定時(shí)取樣測定.

　　2.3.5 金屬離子對孔雀石綠脫色的影響

　　分別向培養(yǎng)基中添加終濃度為1.0、2.0和3.0 mmol·L-1的CuCl2、FeCl3、CaCl2、ZnCl2、MgCl2和MnCl2, 滅菌后, 添加已滅菌的終濃度為100 mg·L-1的孔雀石綠, 接種等量菌株CV-v過夜培養(yǎng)物(菌體干重為0.1~0.2 g·L-1), 并于30 ℃、180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng), 6 h后取樣測定.

　　所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次, 并同時(shí)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn).

　　2.3.6 菌株CV-v對孔雀石綠的脫色動(dòng)力學(xué)研究

　　在酵母粉溶液(2.0 g·L-1)中添加100 mg·L-1的孔雀石綠, 接種后, 每隔一定時(shí)間收集4 mL樣品, 于12000 r·min-1下離心10 min后, 上清液在620 nm處測定吸光度.所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次并同時(shí)設(shè)置對照實(shí)驗(yàn).

　　2.4 菌株CV-v降解孔雀石綠的酶分析

　　孔雀石綠脫色過程中的相關(guān)酶分析方法參照文獻(xiàn)(Du et al., 2013).配制含有和不含有100 mg·L-1孔雀石綠的酵母粉溶液(2.0 g·L-1), 分別接種等量菌株CV-v過夜培養(yǎng)物(菌體干重為0.1~0.2 g·L-1), 并于30 ℃、180 r·min-1條件下振蕩培養(yǎng), 12 h后取出并收集菌體.菌體沉淀用無菌磷酸鹽緩沖液(100 mmol·L-1, pH=7.4)沖洗3次后, 重懸于5 mL磷酸鹽緩沖液中, 在冰浴條件下(4 ℃)進(jìn)行超聲破碎, 破碎條件為：200 W, 破碎99次, 每次破碎7 s, 破碎間隔時(shí)間為3 s.離心后取上清液, 作為粗酶液進(jìn)行分析.

　　酪氨酸酶、漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶、錳過氧化物酶、NADH-DCIP還原酶及孔雀石綠還原酶酶活測定方法具體參見文獻(xiàn)(Du et al., 2013).酪氨酸酶、漆酶、錳過氧化物酶和木質(zhì)素過氧化物酶的一個(gè)單位定義為一個(gè)吸光度值變化, 單位為unit·min-1·mg-1(以protein計(jì));NADH-DCIP還原酶活性用DCIP的消光系數(shù)(90 L·mmol-1·cm-1)計(jì)算;孔雀石綠還原酶活性用孔雀石綠的消光系數(shù)(1.47×105 L·mmol-1·cm-1)計(jì)算.

　　2.5 菌株CV-v降解孔雀石綠產(chǎn)物的測定2.5.1 紫外可見光分光光度法(UV-Visible analysis)

　　分別收集降解前(未加菌)和降解后(培養(yǎng)24 h后)的混合培養(yǎng)物, 并在10000 r·min-1條件下離心10 min, 取上清, 用Evolution 300分光光度計(jì)進(jìn)行全波長掃描分析.

　　2.5.2 紅外掃描光譜法(Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FTIR)

　　分別收集降解前(未加菌)和降解后(培養(yǎng)24 h后)的混合培養(yǎng)物, 并在10000 r·min-1條件下離心10 min, 取上清, 用Bruker VERTEX 70紅外光譜儀在可清洗的水溶液專用透射池中進(jìn)行紅外掃描分析, 掃描波長范圍為1000~3000 cm-1, 檢測器系統(tǒng)為DigiTect.

　　2.5.3 氣相質(zhì)譜分析(Gas Chromatography-Mass Spectrometry, GC-MS)

　　分別收集接種前和接種后的混合培養(yǎng)物4 mL, 經(jīng)三苯甲烷萃取后, 用于降解產(chǎn)物的分析.采用Trace GC Ultra和ISQ II MS對降解產(chǎn)物進(jìn)行分析.GC-MS柱為TG-35ms的石英毛細(xì)管柱(30 m ×0.25 m id, 0.25 μm), 柱溫設(shè)定為從100 ℃程序升溫至280 ℃(8 ℃·min-1), 10 min內(nèi)升至280 ℃.載氣(氦氣)流速為1 mL·min-1, 注射器和檢測器溫度為250 ℃.降解產(chǎn)物的質(zhì)譜分析在EI模式、70 eV條件下進(jìn)行滿掃.

　　3 結(jié)果與討論(Results and discussion)3.1 菌株CV-v對孔雀石綠的脫色特性3.1.1 碳氮源對孔雀石綠脫色的影響

　　碳氮源對菌株CV-v脫色孔雀石綠的影響如圖 1所示.培養(yǎng)6 h后, 多數(shù)供試碳源對脫色沒有顯著影響, 而當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間超過12 h后, 所測碳源均對脫色有顯著的促進(jìn)效應(yīng), 其中, 葡萄糖對脫色的促進(jìn)效果最為顯著(圖 1a).任倩等(2007)在報(bào)道中指出, 葡萄糖作為菌體生長基質(zhì)的碳源, 對脫色有顯著影響, 本研究進(jìn)一步印證了該結(jié)論.在供試氮源中, 無機(jī)氮源(氯化銨和硝酸鈉)對脫色沒有顯著影響, 而多數(shù)有機(jī)氮源(牛肉浸提物、酵母粉、蛋白胨、谷氨酸和甘氨酸)則對脫色有顯著的影響, 其中, 酵母粉對脫色促進(jìn)效果最優(yōu), 而谷氨酸則對脫色有微弱的抑制效應(yīng).

　　圖 1碳源(a)和氮源(b)對孔雀石綠脫色的影響

　　3.1.2 pH值和溫度對孔雀石綠脫色的影響

　　pH值和溫度對孔雀石綠脫色的影響如圖 2所示.當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到6 h后, 菌株CV-v在pH=3.0~10.0之間對孔雀石綠的脫色率均在80%以上, 而當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間達(dá)到12 h后, 該菌株對孔雀石綠的脫色率維持在90%以上.隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長, 當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間超過24 h后, 該菌株在pH=3.0~10.0之間可完全脫色孔雀石綠.安賢惠等(2013)的研究中分離了一株Aeromonas屬的菌株, 該菌株對100 mg·L-1孔雀石綠的脫色率達(dá)到96.9%需要48 h以上的培養(yǎng)時(shí)間;Lv等(2013)的研究發(fā)現(xiàn), 菌株Deinococcus radiodurans R1對孔雀石綠的脫色效果在pH 6.0~8.0之間時(shí)最優(yōu), 而當(dāng)pH值低于6.0或高于8.0時(shí), 該菌株對孔雀石綠的脫色率則急劇下降;本課題組以往的研究中分離的菌株Enterobater sp. DH9在pH=3.0~9.0之間時(shí), 也需培養(yǎng)24 h以后, 對孔雀石綠的脫色率才能維持在90%以上.與以往已報(bào)道菌株相比, 本研究中的菌株CV-v在pH=3.0~10.0之間對孔雀石綠的12 h脫色率在90%以上, 脫色優(yōu)勢顯著, 環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng), 具有廣闊的應(yīng)用前景.

　　圖 2 pH值(a)和溫度(b)對孔雀石綠脫色的影響

　　在溫度為10~50 ℃的范圍內(nèi), 菌株CV-v對孔雀石綠的6 h脫色率維持在80%以上;當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間超過24 h后, 該菌株在10~50 ℃內(nèi)對孔雀石綠的脫色率在90%以上, 在20~50 ℃的條件下, 可完全脫色孔雀石綠, 溫度適應(yīng)性強(qiáng), 進(jìn)一步說明了該菌株具有較大的實(shí)際應(yīng)用潛能.以往研究顯示, 溫度通過影響脫色菌株的生物量能夠顯著影響細(xì)菌對染料的脫色效率.一般而言, 在大多脫色體系中, 脫色率隨著溫度的升高而呈現(xiàn)上升趨勢, 最大脫色率一般為菌體生長的最適溫度, 只有某些嗜熱菌株的最適脫色溫度最高可達(dá)60 ℃左右(Pearce et al., 2003).相比較而言, 本研究中的菌株CV-v在50 ℃的條件下培養(yǎng)6 h后, 能夠脫色95%以上的孔雀石綠(100 mg·L-1), 脫色優(yōu)勢顯著, 適應(yīng)性較強(qiáng), 有望用于解決夏季溫度過高, 污泥降解染料效率極低的實(shí)踐難題.

　　3.1.3 染料濃度和金屬離子對孔雀石綠脫色的影響

　　染料濃度對孔雀石綠脫色的影響如圖 3a所示.隨著染料濃度的升高, 菌株CV-v對孔雀石綠的脫色率呈逐漸降低的趨勢, 當(dāng)孔雀石綠濃度低于500 mg·L-1時(shí), 菌株CV-v在6 h內(nèi)即可完全脫色孔雀石綠;當(dāng)孔雀石綠濃度高于800 mg·L-1后, 脫色率降至80%以下, 而當(dāng)孔雀石綠濃度為1000 mg·L-1時(shí), 脫色率則降至40%左右.Pearce等(2003)的報(bào)道中指出, 染料作為目標(biāo)污染物, 其濃度會顯著影響脫色率, 當(dāng)染料濃度過高時(shí), 可能對降解菌株產(chǎn)生毒性效應(yīng).因此, 當(dāng)孔雀石綠濃度超過500 mg·L-1后, 孔雀石綠對菌株CV-v的毒性效應(yīng)開始顯現(xiàn)出來, 進(jìn)而導(dǎo)致脫色率的降低.

　　圖 3染料濃度(a)和金屬離子(b)對孔雀石綠脫色的影響

　　金屬離子對孔雀石綠脫色的影響如圖 3b所示.當(dāng)供試金屬離子濃度低于1 mmol·L-1時(shí), 多數(shù)金屬離子對脫色沒有顯著影響, 或有微弱促進(jìn)或抑制作用;而當(dāng)金屬離子濃度升高至2 mmol·L-1時(shí), 銅離子和鐵離子已對脫色有顯著的抑制效應(yīng);隨著金屬離子濃度的繼續(xù)升高, 當(dāng)其濃度達(dá)到3 mmol·L-1后, 鈣離子和鎂離子也開始對脫色有微弱的抑制效應(yīng).同時(shí), 當(dāng)體系中鐵離子濃度達(dá)到3 mmol·L-1后, 孔雀石綠脫色率有所提升, 這可能是因?yàn)樵谠摑舛认? 鐵離子開始發(fā)揮絮凝作用, 進(jìn)而導(dǎo)致孔雀石綠脫色率的升高.總體而言, 3 mmol·L-1以下濃度的錳離子對該菌株脫色孔雀石綠有較好的促進(jìn)作用.

　　3.1.4 菌株CV-v對孔雀石綠的脫色動(dòng)力學(xué)特征

　　Das等(2010)的報(bào)道中指出, 微生物對染料的脫色動(dòng)力學(xué)可以用零級(式(1))、一級(式(2))和二級模型(式(3))進(jìn)行模擬.

(1) (2) (3)

　　式中, Ct表示染料在t時(shí)的濃度(mg·L-1), C0表示染料溶液的初始濃度(mg·L-1), t表示培養(yǎng)時(shí)間(min), k0、k1和k2分別指零級、一級和二級速率常數(shù).基于以上公式, 將本研究中的動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合后做圖, 結(jié)果如圖 4所示.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 菌株CV-v對孔雀石綠脫色的動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與模型2擬合度最高(R2=0.9755), 而與模型1(R2=0.7745)和模型3(R2=0.677)的擬合度較低.因此, 菌株CV-v對孔雀石綠脫色的動(dòng)力學(xué)特征可以用一級模型來進(jìn)行解釋.

　　圖 4菌株CV-v對孔雀石綠的脫色動(dòng)力學(xué)特征

　　3.2 菌株CV-v降解孔雀石綠的酶學(xué)特征

　　已有報(bào)道顯示, 染料的微生物降解主要由微生物體內(nèi)的相關(guān)酶催化引起, 其中, 酪氨酸酶、漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶、錳過氧化物酶和NADH-DCIP還原酶等已被證實(shí)可能與染料的微生物降解相關(guān)(Shedbalkar et al., 2008).本研究中菌株CV-v降解孔雀石綠過程中相關(guān)酶活結(jié)果見表 1.如表 1所示, 孔雀石綠降解過程中, 酪氨酸酶、漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶和NADH-DCIP還原酶的酶活性在降解后都略有升高, 但這種變化趨勢不顯著(p>0.05), 說明這些酶與菌株CV-v降解孔雀石綠關(guān)系不大.而錳過氧化物酶和孔雀石綠還原酶的酶活性則在降解后有顯著升高(p < 0.05), 說明這兩種酶可能與菌株CV-v降解孔雀石綠相關(guān).有研究顯示, 錳過氧化物酶發(fā)揮催化作用需要錳離子的參與(李旭東等, 2008), 而本研究中錳過氧化物酶的酶活性在降解后升高與金屬離子影響實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)的錳離子促進(jìn)脫色的現(xiàn)象相互印證.

　　表 1 菌株CV-v降解孔雀石綠相關(guān)酶的酶活性

　注：a.單位為unit·mg-1·min-1(以protein計(jì)); b.單位為μg·mg-1·min-1, 以每分鐘每mg蛋白的DCIP減少量(μg)表示; c.單位為μg·mg-1·min-1, 以每分鐘每mg蛋白的孔雀石綠減少量(μg)表示; 表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差; *p≤0.05, **p≤0.01.

　　3.3 菌株CV-v降解孔雀石綠的產(chǎn)物分析及降解途徑推測

　　利用UV-visible全波長掃描(200~800 nm)對孔雀石綠脫色前后進(jìn)行分析的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 5所示.已有研究表明, 微生物對染料的脫色若由生物降解引起, 則染料的特征吸收峰在脫色后完全消失, 可產(chǎn)生新的產(chǎn)物吸收峰;若脫色由生物吸附引起, 則脫色前后的全波長掃描圖譜中的吸收峰呈比例性降低, 且不產(chǎn)生新的吸收峰(Khataee et al., 2010;Parshetti et al., 2010).因此, 由圖 5可知, 孔雀石綠的特征吸收峰(620 nm)在脫色后完全消失, 同時(shí), 210 nm處的吸收峰略有升高, 且300~400 nm之間吸光度較脫色前也略有升高, 表明該菌株對孔雀石綠的脫色是由生物降解引起.

　　圖 5孔雀石綠脫色前后的全波長掃描圖譜

　　進(jìn)一步的FTIR掃描分析圖譜(1000~3000 cm-1)如圖 6所示.對比孔雀石綠降解前后的紅外掃描圖譜可以發(fā)現(xiàn), 降解后產(chǎn)生的新吸收峰峰位主要位于2754、1976、1710、1641、1550、1530和1366 cm-1處.經(jīng)檢索可知, 波數(shù)為2754 cm-1處的吸收峰可能是由于—OH基團(tuán)的伸縮振動(dòng)引起的, 波數(shù)為1976 cm-1處的吸收峰可能是由苯環(huán)上的—CH基團(tuán)的伸縮振動(dòng)引起的, 波數(shù)為1710 cm-1處的吸收峰可能是由脂肪酮的—CO基團(tuán)的伸縮振動(dòng)引起的, 波數(shù)為1641 cm-1處的吸收峰可能是由二芳酮的—CO基團(tuán)的伸縮振動(dòng)引起的, 波數(shù)為1550、1530 cm-1處的吸收峰可能是由—NH2基團(tuán)的伸縮振動(dòng)引起的, 波數(shù)為1366 cm-1處的吸收峰可能是由芳胺的—NH2基團(tuán)的伸縮振動(dòng)引起的(吳瑾光1994).因此, 孔雀石綠降解后出現(xiàn)的新的產(chǎn)物基團(tuán)主要包括—OH、—CO和—NH2.

　　圖 6孔雀石綠脫色前后的FTIR圖譜

　　孔雀石綠降解前后的GC-MS分析結(jié)果表明, 孔雀石綠降解的主要檢出產(chǎn)物為二甲氨基二苯甲酮(保留時(shí)間為14.07 min), 具體如圖 7所示.該產(chǎn)物與GC-MS NIST數(shù)據(jù)庫中的標(biāo)準(zhǔn)物比對的相似度為70.3%.從二甲氨基二苯甲酮質(zhì)譜圖上來看, 該產(chǎn)物的特征離子片段主要為：77(82)、105(28)、148(100)和225(36), 與GC-MS NIST數(shù)據(jù)庫中的標(biāo)準(zhǔn)物基本一致, 可以推斷二甲氨基二苯甲酮為孔雀石綠降解的中間產(chǎn)物之一.

　　圖 7二甲氨基二苯甲酮與GC-MS NIST數(shù)據(jù)庫中的標(biāo)準(zhǔn)物比對的質(zhì)譜圖

　　通過孔雀石綠降解中間產(chǎn)物的分析, 可以推測菌株CV-v降解孔雀石綠的主要降解途徑為孔雀石綠經(jīng)孔雀石綠還原酶、錳過氧化物酶等降解相關(guān)酶的催化, 降解生成二甲氨基二苯甲酮和4-羥基-N, N-二甲基苯銨, 二者可能通過進(jìn)一步的脫甲基反應(yīng)生成含—NH2基團(tuán)的產(chǎn)物.具體參見污水寶商城資料或http://wlmqsb.com更多相關(guān)技術(shù)文檔。

　　4 結(jié)論(Conclusions)

　　1) 本研究通過單因素實(shí)驗(yàn)獲知溫度、pH值、碳氮源、金屬離子和初始染料濃度等環(huán)境因素對菌株CV-v脫色孔雀石綠的影響, 結(jié)果表明, 該菌株的pH和溫度適應(yīng)能力較強(qiáng), 應(yīng)用前景廣闊.此外, 菌株CV-v對孔雀石綠脫色的動(dòng)力學(xué)符合一級動(dòng)力學(xué)模型.

　　2) 酶分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 錳過氧化物酶和孔雀石綠還原酶可能參與菌株CV-v降解孔雀石綠的反應(yīng)過程.

　　3) 代謝產(chǎn)物分析結(jié)果表明, 菌株CV-v降解孔雀石綠的主要產(chǎn)物為二甲氨基二苯甲酮和4-羥基-N, N-二甲基苯銨, 二者可能通過進(jìn)一步的脫甲基反應(yīng)生成含—NH2基團(tuán)的產(chǎn)物.